便攜式酶標儀的自檢和校準從上述所獲的酶標儀性能的有關信息資料,基本上可以說是間接的,有了目標以后,如果還想獲得對某一酶標儀的感性認識,可以對其進行自檢。
如何做好便攜式酶標儀的自檢和校準工作?主要有下述幾個方面:
(一)外觀:
酶標儀上應有儀器名稱,型號,編號,生產廠家,出廠日期和電源電壓;各調節(jié)旋鈕,按鍵和開關均能正常工作,外表面無明顯機械損傷;顯示文字應清楚完整。
(二)酶標儀的穩(wěn)定性(漂移):
選用492nm波長,在吸光度o.0A處,測量標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測量操作按儀器說明進行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測量值之差不應超過±0.005A。
(三)吸光度測量的準確度:
選用405,492和620nm波長,以空氣為參比,分別測量標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用專用測試板代替酶標板,按儀器說明連續(xù)測量3次,按下式計算準確度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標準值)。
(四)吸光度測量的重復性:
波長選用同(3),在酶標板排加注空白溶液,排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復測量5次。記錄每次測量的排吸光度值,取排任一孔吸光度值與各次對應孔吸光度值。按下式計算重復性:
(五)酶標儀的線性:
選用540nm波長,將標稱值o.5,1.0A中性濾光片分別放入專用測試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復測量3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專用測試板的同一孔位中,重復測量3次。線性誤差:
式中A1為片中性濾光片吸光度均值,A:為片中性濾光片吸光度均值,A1,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
(六)測量速度的檢定:
選用492nm波長,放人96孔酶標板進行測量,用秒表計測儀器打印出全部數據的時間。
酶標儀除了在選購時,應盡可能自檢外,在用于中也應定期檢定,以保證酶標儀測量的有效性。
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內冷卻30min,在分析天平上準確稱取o.2829g,置于100ml燒杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,搖勻。