一、原位雜交儀應(yīng)用 ①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達和基因組進化的研究;②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測;
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測;
④基因在染色體上的定位;
⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
⑥分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。
二、注意事項
1、固定液的選擇及固定時間 石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定6~48h,其它固定液對實驗結(jié)果可能產(chǎn)生一定的影響。 組織離體后應(yīng)盡快固定,建議在標本離體后30min內(nèi)固定。如樣本固定不及時,熒光信號會減弱。 固定液的體積是組織體積的4~20倍,否則固定不充分,容易出現(xiàn)無信號或者信號很弱的現(xiàn)象。 而且,為了保證信號的準確性,蠟塊最好在2年內(nèi)進行檢測,已經(jīng)切好的切片在6周內(nèi)檢測最佳。
2、組織切片和載玻片的選擇 組織切片4~5μm 厚,過厚或過薄的切片均會對信號的強弱產(chǎn)生影響,而且切片應(yīng)完整,質(zhì)量良好,否則會在預(yù)處理時掉片。 載玻片的選擇建議使用防脫載玻片,有條件的實驗室可使用更好的陽離子或者陰離子專用載玻片,可有效防止脫片現(xiàn)象的發(fā)生。